全自動機械臂固相萃取儀－高效液相色譜法 檢測牛奶中阿維菌素殘留量

1 前言

目前，阿維菌素作為牛常用的抗寄生蟲藥物，容易造成牛組織中藥物殘留超標，且會污染牛奶。因此，監控該類有無在畜禽類可食性組織及產品中的殘留顯得非常重要。采用海能全自動固相萃取儀-高效液相色譜法進行檢測牛奶中阿維菌素農藥殘留，有效的縮短樣品中目標物的固相凈化所需要的時間，提高了工作效率，也節約了人力；且能精準的控制上樣、淋洗、洗脫等溶劑流速，提高了樣品目標物的回收率。

2 儀器與試劑

2.1儀器

SPE400全自動機械臂固相萃取儀；HN200多功能氮吹儀；高效液相色譜儀（配熒光檢測器）；分析天平；高速分散均質機；渦動混合儀；離心機；其他常規玻璃儀器；濾膜（有機相，0.45μm）。

SPE400全自動機械臂固相萃取儀

2.2試劑及耗材

實驗用水應符合GB/T6682中一級用水的規格，使用試劑除特殊說明外，均為分析純。

乙腈（色譜純）；甲醇（色譜純）；三氟乙酸酐；三乙胺；異辛烷；N-甲基咪唑；阿維菌素標準品：含量≥98%。

固相萃取柱：C18，500mg/6ml。

衍生化試劑A液：取N-甲基咪唑1mL、乙腈1mL，混勻，現配現用。

衍生化試劑B液：取三氟乙酸酐1mL、乙腈2mL，混勻，現配現用。

洗滌液：取乙腈30mL、水70mL和三乙胺20μL，混勻。

3 實驗方法

3.1取樣

取適量新鮮的牛奶，用高速分散均質機將樣品混合均勻。

3.2提取

稱取樣品5g于50mL離心管中，加乙腈8mL，渦動1min，4500r/min離心10min，取上清液。殘渣中加乙腈8mL，重復提取一次，合并兩次上清液，加水20mL、三乙胺50μL，混勻，備用。

3.3固相萃取柱凈化（C18柱）

表1 固相凈化條件

3.4濃縮及衍生化

用氮吹儀吹至近干，備用。于備用管中依次加入衍生化試劑A液100μL、衍生試劑B液150μL，密閉，渦動10s，依次加冰醋酸50μL和三乙胺各50μL，渦動10s，于室溫密閉反應30min，加甲醇650μL混勻。過濾，供高效液相色譜法測定。

3.5色譜測定條件

色譜柱：C18，粒徑5μm，柱長250mm，內徑4.6mm；

流速：1.0mL/min；

激發波長：365nm；   發射波長：475nm；

柱溫：30℃；

進樣體積：20μL。

流動相：乙腈：水=（90+10，V/V），

3.6標準曲線的制備

精密量取10μg/mL阿維菌素類藥物混合標準貯備液適量，用乙腈稀釋，配制成濃度為2、5、10、50、1000ng/mL的系列標準溶液，各取1.0mL于5mL試管中，于60℃水浴氮氣吹干，依次加入衍生化試劑A液100μL、衍生試劑B液150μL，密閉，渦動10s，依次加冰醋酸50μL和三乙胺各50μL，渦動10s，于室溫密閉反應30min，加甲醇650μL混勻，供高效液相色譜測定。以測得峰面積為縱坐標，對應的標準溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線。求出回歸方程和相關系數。

3.7測定

取試樣及不添加樣品的空白溶液，按外標法，以峰面積計算，根據回歸方程，得出試樣中阿維菌素含量。

4 實驗結果

4.1結果

4.2結論

采用SPE400全自動機械臂固相萃取儀可以快速對樣品提取液進行凈化和富集，可做到無人看守、批量處理，省去實驗員繁瑣的加液取液等人工操作，方便快捷。采用SPE400全自動機械臂固相萃取儀對樣品提取液可以精準的控制進樣、加液等流速，有利于固相小柱進行萃取分離，從而實現較好的樣品檢測重復性。         

參考文獻

[1] GB 29696-2013 食品安全國家標準 牛奶中阿維菌素類藥物多殘留的測定[S].