凱氏定氮法測定破傷風抗毒素中的蛋白氮含量

1 前言

破傷風抗毒素是由破傷風類毒素免疫馬所得的血漿，經胃酶消化后純化制成的液體抗毒素球蛋白制劑，用于預防和治療破傷風梭菌引起的感染。其中蛋白質含量是其需要檢定的指標之一，本實驗參照藥典中的方法使用全自動凱氏定氮儀對其蛋白質含量進行測定。

2 儀器與試劑

2.1儀器

K1100F全自動凱氏定氮儀，SH420F石墨消解儀，分析天平。

2.2試劑

硫酸（分析純），20g/L硼酸溶液，溴甲酚綠-甲基紅混合指示劑，40%氫氧化鈉。

3 實驗方法

3.1樣品制備

3.1.1非蛋白氮供試品溶液的制備

精密量取供試品2mL，加水14mL，10%鎢酸鈉溶液2mL，0.33moL/L硫酸溶液2mL，搖勻，靜置30分鐘，過濾，棄去初濾液，取續濾液作為非蛋白氮供試溶液。

3.1.2總氮供試品溶液的制備

取混合好的供試品，精確量取2mL，置10mL容量瓶中，用水稀釋到刻度，作為總氮供試品溶液。

3.2取樣

分別精確量取1mL制備好的總氮溶液及2mL非蛋白氮溶液加入消化管中，各加入0.3g硫酸鉀與30%硫酸銅水溶液5滴，再沿瓶壁滴加硫酸2.0ml。

3.3消解

4 測試結果

4.1實驗結果

表3 破傷風抗毒素中氮含量的測試數據

蛋白氮含量=（7.05-0.07）×6.25=43.625mg/mL

4.2結論

從實驗結果可以看到，采用K1100F凱氏定氮儀可以準確的檢測破傷風抗毒素中的總氮含量。由于樣品中非蛋白氮含量較低，因此可能會影響結果平行性。

參考文獻

[1] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典[ M ] . 四部. 北京: 中國醫藥科技出版社, 2015: 附錄0731蛋白質含量測定 第一法 凱氏定氮法