聚焦3.15：養殖海參中抗生素殘留的測定方法

今年的3.15晚會“遲到”了，但沒有缺席。昨晚，推遲了4個月的3.15晚會終于來了，精裝修房施工質量難保證、“漢堡王”使用過期食材、“趣頭條”推送非法廣告、養殖海參敵敵畏成箱放……今年被點名的又不少。

不看不知道，原來海參養殖水這么深，此次3.15晚會主要曝出了有關海參養殖的5大“黑幕”：

● 大量使用敵敵畏清池

● 排回大海污染環境
● 使用抗生素獸藥原粉防病
● 南方參冒充北方參
● 麥芽糊精腌泡增重

看上去全產業鏈沒有一處能讓人放心。這些行為不但嚴重違反了相關法規，還給環境造成了極大的危害。

記者了解到，大棚養殖海參在換水的時候，容易誘發疾病，這時就需要使用一些抗生素來預防。一位獸藥店經營者告訴記者：“拌抗生素，都偷著用，有查的，污染水質。”

由于獸藥原粉濃度高，使用時容易引發毒副作用，以及食品安全問題。我國獸藥管理條例明確規定：禁止將獸用原料藥拆零銷售或者銷售給獸藥生產企業以外的單位和個人。

我國水產養殖濫用抗生素現狀令人憂心，不僅對水質造成污染，同時水產品中抗生素殘留嚴重，人長期攝入含抗生素殘留的水產品后，藥物不斷在體內蓄積，當濃度達到一定量后，就會對人體產生毒性作用。

土霉素、四環素和金霉素均屬于四環素類抗生素，四環素類藥物的毒性反應主要表現為對胃、腸、肝臟的損害及牙齒的染色等。還會造成過敏反應，二重感染，致畸胎作用。

為了保障人民的身體健康，利于政府對食品安全的監管，我國于2002年提出了水產品中土霉素、四環素、金霉素殘留的測定方法：SC/T 3015-2002 水產品中土霉素、四環素、金霉素殘留的測定。

儀器與試劑

1、儀器

高效液相色譜儀、分析天平、均質器、預處理柱：ODS C18、離心機：4000r/min、負壓抽濾器。

2、試劑

乙腈：色譜級。

0.01mol/L磷酸二氫鈉溶液：稱取1.56g（稱準至0.01g）分析純磷酸二氫鈉溶于蒸餾水中，定容至1000mL，以磷酸調pH至2.5，經微孔濾膜（0.45μm）過濾后備用。

土霉素、四環素、金霉素混合標準溶液：稱取土霉素0.01g（稱準至0.0001g）、四環素0.01g（稱準至0.0001g），金霉素0.02g（稱準至0.0001g），溶于0.01mol/L磷酸二氫鈉溶液中，定容至100mL，此溶液每毫升含土霉素100μg，四環素100μg，金霉素200μg。

以上標準品均按1000IU/mg 計算，本溶液于0℃~4℃時保存，可使用一周。

土霉素、四環素、金霉素、混合標準使用溶液：移取混合標準溶液10.0mL，定容至100.0mL，得土霉素、四環素濃度為10μg/mL，金霉素濃度為20μg/mL的混合標準溶液。

以上述混合標準溶液配制土霉素、四環素標準使用濃度系列： 0.05、0.10、0.20、0.25、0.50、1.0μg/mL; 以上述混合標準溶液配制金霉素標準使用濃度系列： 0.10、0.20、0.40、0.50、1.0、2.0μg/mL。此標準使用液使用時現配。

0.5% 或1%高氯酸溶液。

甲醇：分析純。

5%乙二胺四乙酸二鈉溶液：取5g 分析純乙二胺四乙酸二胺（EDTA-2Na）溶解定容至100mL。

正已烷：分析純。

氮氣：純度大于99%。

實驗方法

1、取樣

稱取5.000g± 0.001g樣品，置于50mL離心管中，加入0.5%高氯酸溶液10mL(水溶液蛋白含量高的樣品，用1%高氯酸溶液)，用均質器均質30s，于振蕩器上振蕩提取3min，以4000r/min 離心10min，取上清液于50mL試管中，向離心管中的殘渣再加入0.5%高氯酸溶液5mL，重復操作一次，合并上清液。加入1mL正己烷，振蕩1min后，離心，除去正己烷相；再加入1mL正己烷，振蕩1min后，離心，除去正己烷相。水相用ODS-C18柱（預先用5mL甲醛、2mL5%乙二胺四乙酸二鈉溶液、5mL實驗用水洗過）預處理，用10mL蒸餾水洗去雜質，以5mL甲醛洗脫，收集洗脫液，40℃水域中氮氣吹干，以甲醛定容至1.0mL，以0.45μm濾膜過濾，濾液備用。

2、色譜參考條件

儀器: 高效液相色譜儀：K2025 P2二元高壓輸液泵、K2025 AS自動進樣器、K2025 CO柱溫箱、K2025 UVD紫外-可見光檢測器；

色譜柱：ODS-C18，長250mm，內徑4mm，粒度5.0μm；

流動相：乙腈：0.01mol/L磷酸二氫鈉溶液（26：74）；

流速：1.0mL/min；

進樣量：30μL；

檢測波長：355nm；

柱溫：37℃。

3、測試

分別取30μL標準使用溶液，以峰面積為縱坐標，標準樣品含量為橫坐標，繪制工作曲線。取試樣溶液30μL，在高效液相色譜儀上測定峰面積，從工作曲線計算濾液中土霉素、四環素、金霉素的含量。

悟空K2025高效液相色譜儀

可靠

強化可靠性設計理念，采用全球高品質核心元器件，歷經權威機構可靠性驗證，確保系統長期穩定運行；

精準

獨特的送液與進樣技術，結合高靈敏度檢測器與強大的數據處理軟件，確保分析結果精密準確；

友好

簡潔易用的Wookinglab界面，結合多項人性化的細節設計，使儀器的操控更加便捷高效；

合規

Wookinglab采用數據庫存儲模式，支持多級權限管理，具備完善的審計追蹤功能，充分滿足FDA 21 CFR Part 11要求。