聚焦3.15：養殖海參中敵敵畏的測定方法

今年的3.15晚會“遲到”了，但沒有缺席。昨晚，推遲了4個月的3.15晚會終于來了，精裝修房施工質量難保證、“漢堡王”使用過期食材、“趣頭條”推送非法廣告、養殖海參敵敵畏成箱放……今年被點名的又不少。

不看不知道，原來海參養殖水這么深，此次3.15晚會主要曝出了有關海參養殖的5大“黑幕”：

● 大量使用敵敵畏清池

● 排回大海污染環境
● 使用抗生素獸藥原粉防病
● 南方參冒充北方參
● 麥芽糊精腌泡增重

看上去全產業鏈沒有一處能讓人放心。這些行為不但嚴重違反了相關法規，還給環境造成了極大的危害。

關于海參養殖中大量使用敵敵畏這一現象，顯然是違法的。敵敵畏屬于農藥，按照我國的農藥管理條例，不能盲目擴大農藥的使用范圍。

敵敵畏是什么？

敵敵畏（Dichlorvos）是一種著名的有機磷類的農藥。這類農藥的特點是便宜且高效，我國有機磷類農藥的產量居世界第二。

毒性如何？

敵敵畏相比于其他的有機磷類農藥，急性毒性算是比較大的了，也是很多其他有機磷類農藥的代謝產物，屬于國家明令禁止添加的非食用物質，長期暴露會有致癌性和神經毒性，所以能少接觸盡量少接觸。

為了保障人民的身體健康，加強對食品安全的監管，我國于2016年提出敵敵畏的檢測方法：GB 23200.94-2016 食品安全國家標準 動物源性食品中敵百蟲、敵敵畏、蠅毒磷殘留量的測定 液相色譜-質譜/質譜法。

儀器與試劑

1、儀器

高效液相色譜-質譜/質譜儀，超聲波清洗儀，分析天平、旋渦混勻器、旋轉蒸發儀、離心機、均質器。       

2、試劑

乙腈，甲醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、環己烷、硫酸鈉、乙酸銨、符合GB/T6682的一級水、敵敵畏標準品：CAS 62-73-7，純度≥97.6%。

溶液配制：50mmol/L乙酸銨溶液：稱取0.385g乙酸銨溶于1000mL 水中。

敵敵畏標準儲備液：準確稱取適量敵敵畏標準品，用甲醇配制成濃度為100μg/mL濃度的混合標準儲備液。此溶液在0°C～4°C冰箱中避光保存，可使用3個月。

空白樣品提取液：用不含敵敵畏殘留的樣品，按照3.2制備空白樣品提取液。

敵敵畏標準工作溶液：根據需要用空白樣品提取液將標準儲備液稀釋成50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL的混合標準工作溶液。置于0°C～4°C冰箱中避光保存，可使用3天。

實驗方法

1、干海參的復水

1.1預浸泡

取2只-3只干海參，稱重約10g（精確至0.01g），置于1000mL燒杯中，倒入水（水量約為海參質量的50倍，并應浸沒參體），再蓋上表面皿，室溫浸泡24h。

1.2清洗

在浸泡液中剖開海參體，清洗海參附著的泥砂，去除嘴部石灰質后，切成寬約5mm條狀；將海參體，泥砂及嘴部石灰質均保留在原浸泡液中。

1.3水煮

將經1.2處理的試樣及浸泡液于原燒杯中，蓋上表面皿，大火煮沸，然后調至小火，保持沸騰繼續煮30min，晾至室溫后，置于0℃~10℃冰箱中，放置20h。煮沸及浸泡過程中應保持水量浸沒參體。

1.4試樣

將1.3處理的浸出液及海參體全部倒入1000mL量筒中，定容至600mL，混勻。取出海參放入燒杯中，加入600mL水，按1.3的方法再水煮一次，將在冰箱放置后的海參取出，用濾紙吸去表面水分，絞碎用于藥物殘留的測定。

2、提取與凈化

2.1 準確稱取5g均勻試樣（精確到0.01g）于50mL具塞試管中，加入5g無水硫酸鈉混勻，再加入15mL二氯甲烷，用均質器(10000r/min)均質2min，4000r/min離心3min，將有機相轉移至100 mL梨形蒸餾瓶中，殘渣再用2×10mL二氯甲烷均質提取二次。

2.2 離心合并有機相，于40℃旋轉蒸發至2mL，將樣液轉移至5mL刻度試管中，并用少量二氯甲烷洗滌梨形蒸餾瓶，合并洗滌液到刻度試管中，室溫通氮濃縮至干。定量加入1.0mL乙腈溶解殘渣，加入2mL環己烷旋渦混勻2min后，2500r/min離心3min，將下層乙腈相過0.45μm微孔濾膜后，供液相色譜-質譜/質譜儀測定。

3、色譜參考條件

3.1 色譜柱：柱填料為十八烷基硅烷鍵合相的色譜柱，4.6×150mm，5μm或相當者；

3.2 流動相：甲醇：50mmol/L乙酸銨；

3.3 梯度洗脫程序：

3.4 流速：0.50mL/min或根據儀器條件優化；

3.5 柱溫：40℃；

3.6 進樣量：10μL；

3.7 離子源：電噴霧離子源；

3.8 掃描方式：正離子；

3.9 檢測方式：多反應監測（MRM）；

3.10 質譜參考條件

監測離子對及電壓參數：

a) 窗簾氣（CUR）：15.00Pa；

b) 霧化氣（GS1）：40.00Pa；

c) 輔助加熱氣（GS2）：45.00L/min；

d) 碰撞氣（CAD）：7.00Pa；

e) 離子源噴霧器電壓（IS）：5000.00V；

f) 噴霧針溫度：（TEM）：550.00℃；

g) 定性離子對、定量離子對、去簇電壓、碰撞能量、碰撞室出口電壓見下表。

4、測試

分別取10μL敵敵畏標準工作液和試樣溶液，在高效液相色譜-質譜/質譜儀上測定敵敵畏的峰面積，用外標法計算敵敵畏殘留量。

悟空K2025高效液相色譜儀

可靠

強化可靠性設計理念，采用全球高品質核心元器件，歷經權威機構可靠性驗證，確保系統長期穩定運行；

精準

獨特的送液與進樣技術，結合高靈敏度檢測器與強大的數據處理軟件，確保分析結果精密準確；

友好

簡潔易用的Wookinglab界面，結合多項人性化的細節設計，使儀器的操控更加便捷高效；

合規

Wookinglab采用數據庫存儲模式，支持多級權限管理，具備完善的審計追蹤功能，充分滿足FDA 21 CFR Part 11要求。