分光光度法檢測蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留
前言
在蔬菜生長過程中，有機磷和氨基甲酸酯類農藥對蔬菜上的多種害蟲均有較好的防效作用。但是，殘留在蔬菜或水果中的農藥進入到有機體內具有積累效果，會對生物體內膽堿酯酶具有抑制作用，使其失去分解乙酰膽堿的能力，造成乙酰膽堿積累，引起神經功能紊亂，從而導致肌體的損害。
現在比較成熟的理化檢測方法一般步驟復雜，所用時間長，且儀器昂貴，分光光度儀通過農藥對酶的抑制可檢測出農藥殘留是否在合格范圍內，具有簡單、快速、成本低等特點。
實驗部分
1.1 測定原理
在一定條件下，有機磷和氨基甲酸酯類農藥對乙酰膽堿酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農藥的濃度呈正相關，正常情況下，酶催化神經傳導代謝產物（乙酰膽堿）水解，其水解產物與顯色劑反應，產生黃色物質，用分光光度計在412nm處測定吸光度隨時間的變化值，計算出抑制率，通過抑制率可以判斷出樣品中是否有高劑量有機磷和氨基甲酸脂類農藥存在。
1.2 實驗儀器
Hanon i2可見分光光度計，天平。
1.3 溶液配制
1.3.1 pH8.0緩沖溶液：分別取11.9g無水磷酸氫二鉀與3.2g磷酸二氫鉀，用1000ml蒸餾水溶解。
1.3.2顯色劑：:分別取160mg硫代乙酰膽堿，加3.0ml蒸餾水溶解，搖勻后置4℃冰箱中保存備用。保存期不超過兩周。
1.3.3底物：取25.0mg硫代乙酰膽堿，加3.0ml蒸餾水溶解，搖勻后置4℃冰箱中保存備用。保存期不超過兩周。
1.3.4乙酰膽堿酯酶：根據酶的活性情況，用緩沖溶劑溶解，3min的吸光度變化值ΔA0值應控制在0.3以上。搖勻后置4℃冰箱中保存備用，保存期不超過四天。
可選用由以上試劑制備的試劑盒。乙酰膽堿酯酶的ΔA0值應控制在0.3以上。
1.4 實驗過程
儀器準備，請參照說明書。
1.4.1樣品前處理：
選取有標準性的蔬菜樣品，沖洗掉表面泥土，剪成1cm左右見方碎片，取樣品1g，放入燒杯或提取瓶中，加入5ml緩沖溶液，振蕩1min~2min，倒出提取液，靜置3min~5min,待用。
1.4.2對照溶液測試：
先于試管中加入2.5ml緩沖溶液，再加入0.15ml酶液、0.1ml顯色劑，搖勻后于37℃左右的溫度放置15min以上（每批樣品的控制時間應一致）。加入0.1ml底物搖勻，此時檢液開始顯色反應，應立即放入儀器比色池中，記錄反應3min的吸光度變化值ΔA0。
1.4.3樣品溶液測試:
先于試管中加入2.5ml樣品提取液，其他操作與對照溶液測試相同，記錄反應結果。
結果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。
當蔬菜樣品提取液對酶的抑制率≥50%時，表示蔬菜中有高劑量有機磷或氨基甲酸脂類農藥存在，樣品為陽性結果。陽性結果的樣品需要重復檢測2次以上。
對陽性結果的樣品，可使用其他方法進一步確定具體農藥品種和含量。
1.6 參考文獻
GB/T 5009.199 蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量的快速檢測。